Определение оптимальных условий экстракции антрагликозидов крушины ломкой коры, разработка и валидация методики их количественного определения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Цель: оптимизация условий экстракции антрагликозидов крушины ломкой коры, разработка и валидация методики их количественного определения с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Материалы и методы. Объектом исследования являлась крушины ломкой кора разных производителей. Работу выполняли на жидкостном хроматографе Agilent 1100 в комплекте с системой подачи и дегазации на четыре растворителя G1311A, диодно-матричным детектором G1315B, термостатом колонок G1316A, устройством для автоматического ввода образцов G1313A. Хроматографический анализ осуществляли на обращенно-фазовой колонке Zorbax SB-C18 (4,6×250 мм, 5 мкм) в градиентном режиме элюирования подвижной фазы, состоящей из ацетонитрила и воды высокоочищенной, доведенной кислотой ортофосфорной до рН 2. Результаты. В результате исследования определены оптимальные условия хроматографического разделения антрагликозидов крушины ломкой коры. Установлены оптимальные условия их экстракции: измельченность растительного сырья - 250 мкм, экстрагент - спирт этиловый 40 %, температура экстракции - 80 ℃, продолжительность экстракции - 90 минут, соотношение сырья и экстрагента - 1:50. Доказано, что разработанная методика количественного определения антрагликозидов крушины ломкой коры является специфичной, линейной, правильной, точной и робастной. Установлена стабильность раствора стандартного образца глюкофрангулина А и полученного экстракта. Заключение. Разработана специфичная методика количественного определения антрагликозидов крушины ломкой коры, которая может быть использована при контроле качества данного вида лекарственного растительного сырья.

1. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. Москва: Медицина, 2002. 656 с.

2. Алексеева Г.М., Белодубровская Г.А., Блинова К.Ф., Гончаров М.Ю., Жохова Е.В., Зеленцова А.Б., Маргна У.В., Повыдыш М.Н., др. Фармакогнозия. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Санкт-Петербург: СпецЛит, 2010. 863 с.

3. Roudbaraki, S. J., Nori-Shargh D. Analysis of the volatile constituents of Frangula alnus Mill. from Iran.Russian Chemical Bulletin. 2016;65(11): 2770-2772. DOI: 10.1007/s11172-016-1652-0.

4. Arsenijevic J., Drobac M., Slavkovska V., Kovacevic N. Anatomical analysis and phytochemical screening of Frangula rupestris (Scop.) Schur (Rhamnaceae). Botanica Serbica. 2018;42(2):231-239. DOI: 10.5281/zenodo.1468339.

5. Романюк А.А., Моисеев Д.В. Крушины ломкой кора: компонентный состав, фармакологические свойства, стандартизация. Вестник фармации. 2020;2(88):95-104. EDN: XWYMHG.

6. Bacha A., Jemel I., Moubayed N., Abdelmalek I. Purification and characterization of a newly serine protease inhibitor from Rhamnus frangula with potential for use as therapeutic drug. Journal of Biotech Research. 2017;7(2):1-13. DOI: 10.1007/s13205-017-0764-z.

7. Izhaki I. Emodin-a secondary metabolite with multiple ecological function in higher plants. New Phytologist. 2002;155(2):205-217. DOI:10.1046/j.1469-8137.2002.00459.x.

8. Sydiskis R., Owen D., Lohr J., Rosler K., Blomster R. Inactivation of enveloped viruses by anthraquinones extracted from plants. Antimicrobical Agents Chemotherapy. 1991;35(12):2463-2466. DOI: 10.1128/AAC.35.12.2463.

9. Manojlovic N., Solujic S., Sukdolak S., Milosev M. Antifungal activity of Rubia tinctorum, Rhamnus frangula and Caloplaca cerina. Fitoterapia. 2005;76(2):244-246. DOI: 10.1016/j.fitote.2004.12.002.

10. Abad M., Ansuategi M., Bermejo P. Active antifungal substances from natural sources. Archive for Organic Chemistry. 2007;7:116-145. DOI: 10.3998/ark.5550190.0008.711.

11. Stef D., Gergen I., Trasca T., Harmanescu M., Lavinia S., Ramona B., Heghedus M. Total antioxidant and radical scavenging capacities for different medicinal herbs. Romanian Biotechnological Letters. 2009;14(5):4704-4707. URL: http://www.rombio.eu/rbl5vol14/12.pdf.

12. Марченко С.И., под ред. Государственная фармакопея Республики Беларусь. Том №2. Контроль качества субстанций для фармацевтического использования и лекарственного растительного сырья. Молодечно: Победа, 2016. 1368 с.

13. Емшинова С.В., Потанина О.Г., Буданова Е.В., Чистяков В.В. Государственная фармакопея Российской Федерации. Том №IV. Москва: Медицина, 2018. 7019 с.

14. Тулегенова А.У. под ред. Государственная фармакопея Республики Казахстан. Том №3. Астана: Жибекжолы, 2014. 872 с.

15. Marianne E.K., editor. Eurорeаn Рhаrmаcороeiа:EDQM. 10th Editiоn. URL: https://pheur.edqm.eu/home

16. Романюк А.А., Моисеев Д.В. Оптимизация условий экстракции франгулина А в крушины ломкой коре методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Вестник Башкирского государственного медицинского университета. 2019;(4):291-295. EDN: QUXDIR.

17. Шеряков А.А, под ред. Государственная фармакопея Республики Беларусь. Том №1. Общие методы контроля качества лекарственных средств. Молодечно: Победа, 2012. 1220 с.

18. Самылина И.А., Моисеев Д.В., Марченко С.И., Веремчук О.А., Моисеева А.М., Сорокина А.А. Гармонизация методических подходов к стандартизации фармакопейных видов растительного сырья, содержащего флавоноиды. Фармация. 2020;5(69):5-11. DOI: 10.29296/25419218-2020-05-01. EDN: PLLZEG.

19. Эпштейн Н.А., Севастьянова В.Л., Королева А.И. Исследование робастности при валидации методик ВЭЖХ и УЭЖХ: современный подход, включающий анализ рисков. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018;4:96-109. EDN: VYLMKT.