Цель исследования - изучение особенностей изолирования гваякола из биологического материала классическими методами. Материалы и методы. Объект исследования - 2-метоксигидроксибензол (гваякол) (фирма «Fluka»), содержащий ≥98% основного вещества. Модели биологических матриц для приготовления искусственных смесей с гваяколом - ткани печени и почек. В качестве основного метода очистки рассмотрена жидкость-жидкостная экстракция. Для идентификации применены ТСХ, УФ-спектрофотометрия и ВЭЖХ. Оценка количественного содержания 2-метоксигидроксибензола в извлечениях проводилась методом УФ-спектрофотометрии. Результаты. Проведены исследования по сравнительному изолированию 2-метоксигидроксибензола (гваякола) из биологического материала рядом классических методов: Стаса-Отто, А.А. Васильевой, В.Ф. Крамаренко и П. Валова. Для идентификации изолируемого аналита использовали методы ТСХ, УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ. Количественную оценку выделяемого соединения проводили методом спектрофотометрии в УФ-области (аналитическая длина волны 277 нм). Предложен модифицированный вариант метода А.А. Васильевой, предусматривающий дополнительный этап экстракционной очистки выделяемого аналита, включающий переведение гваякола в виде ионизированной формы из хлороформного экстракта в водно-щелочной раствор (рН 12,5-13), подкисление водно-щелочного извлечения хлороводородной кислотой до рН 2-3 и экстракцию образовавшейся молекулярной формы гваякола в слой этилацетата. Заключение. На основе предложенной модификации метода А.А. Васильевой разработана методика определения гваякола в тканях трупных органов. При содержании в биоматериале 0,01-0,2% гваякола методика позволяет определять (33,99-34,62)±(5,84-7,35) % анализируемого вещества в тканях печени и (34,87-35,73)±(5,66-6,97) % - в тканях почек.
Objective: the study of the features of isolating guaiacol from a biological material by classical methods. Materials and methods. The object of the study is 2-methoxyhydroxybenzene (guaiacol) (“Fluka” company), containing ≥98% of the main substance. Models of biological matrices for the preparation of artificial mixtures with guaiacol are liver tissue and kidney. Liquid-liquid extraction is considered as the main purification method. TLC, UV spectrophotometry and HPLC are used for identification. Evaluation of the quantitative content of 2-methoxyhydroxybenzene in the extracts was carried out by the method of UV-spectrophotometry. Results. This study was conducted on the comparative isolation of 2-methoxyhydroxybenzene (guaiacol) from biological materials by a number of classical methods: Stas-Otto’s, A.A. Vasilyeva’s, V.F. Kramarenko’s and P. Valov’s methods. The TLC, UV spectrophotometry and HPLC were used to identify the isolated analyte. Quantitative assessment of the isolated compound was performed by the method of spectrophotometry in the UV region (analytical wavelength 277 nm). A modified version of the A.A. Vasilyeva’s method was devised. It provided an additional stage of extraction purification of the isolated analyte consisting of the following: transformation of guaiacol as an ionized form from the chloroform extract into a water-alkaline solution (pH 12.5-13), acidification of the water-alkaline extraction with hydrochloric acid to pH 2-3 and extraction of the resulting molecular form of guaiacol into a layer of ethyl acetate. Conclusion. Based on the modified A.A. Vasilyeva’s method, a protocol for determining guaiacol in the tissues of cadaveric organs was developed. When the content of guaiacol in the biomaterial is 0.01-0.2%, this protocol allows to analyze (33.99-34.62) ± (5.84-7.35) % of the analyte in liver tissues and (34.87-35.73 ) ± (5.66-6.97)% in kidney tissues.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.